1、高效液相色譜儀的系統組成、工作原理

高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出，通過(guò)檢測器時(shí)，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來(lái)。

2、高效液相色譜儀的應用

高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相可選擇的范圍寬，固定相的種類(lèi)繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預處理技術(shù)相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。

隨著(zhù)固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。HPLC成為解決生化分析問(wèn)題最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應用到生物化學(xué)、食品分析、醫藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。液相色譜- 質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等；液相色譜- 紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類(lèi)，海水中的不揮發(fā)烴類(lèi)，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。

3、高效液相色譜儀常見(jiàn)故障處理

LC-10AT高效液相色譜儀是日本島津公司1996年的產(chǎn)品，檢測器為可變波長(cháng)紫外檢測器，色譜柱為島津公司的ODS-C18，大連依利特的ODS-C18。八年的日常工作中遇到了幾種故障，如故障1經(jīng)咨詢(xún)島津公司的工程師后，得以解決；故障2、故障5是頻繁碰到的問(wèn)題等，特作總結如下：

故障1 流動(dòng)相內有氣泡，關(guān)閉泵，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purge鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，進(jìn)入流動(dòng)相，無(wú)論打開(kāi)purge鍵幾次，都無(wú)法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。

原因過(guò)濾器長(cháng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內，過(guò)濾器內部由于霉菌的生長(cháng)繁殖，形成菌團，阻塞了過(guò)濾器，緩沖液難以流暢地通過(guò)過(guò)濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過(guò)濾器進(jìn)入流動(dòng)相。

處理過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時(shí)，輕輕震蕩幾次，再將過(guò)濾器用純水清洗幾次，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purge 鍵，清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，繼續將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒(méi)有氣泡不斷從過(guò)濾器中冒出，說(shuō)明過(guò)濾器內部的霉菌菌團已被硝酸破壞，流動(dòng)相可以流暢地通過(guò)過(guò)濾器。打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)泵，流速調至1.0～3.0ml/min ，純水沖洗過(guò)濾器1小時(shí)左右。即可將過(guò)濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時(shí)即可。

故障2 柱壓高

原因（1）緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內；（2）樣品污染沉積。

處理對于第一種情況先用40～50 ℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后， 用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30 分鐘；對于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，用純水反向沖洗柱子， 然后換成甲醇沖洗，接著(zhù)用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時(shí)間的長(cháng)短由樣品污染的情況而定），再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

故障3 既無(wú)壓力指示，又無(wú)液體流過(guò)。

原因（1）泵密封墊圈磨損；（2）大量氣泡進(jìn)入泵體。

處理對于第一種情況，更換密封墊圈；對于第二種情況，在泵作用的同時(shí)，用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

故障4 壓力波動(dòng)大，流量不穩定。

原因系統中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。

處理工作中注意觀(guān)察流動(dòng)相的量， 保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，避免吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

故障5 出峰不佳，峰分叉。

原因（1）色譜柱被污染；（2）柱頭填料塌陷。

處理對于第一種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著(zhù)用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時(shí)間的長(cháng)短由樣品污染的情況而定），再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。對于第二種情況，擰開(kāi)柱頭，檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分（污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復幾次，直至裝滿(mǎn)填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。

故障6 峰面積重復性不佳。

原因（1）進(jìn)樣閥漏液；（2）加樣針不到位。

處理對于第一種情況更換進(jìn)樣閥墊圈；對于第二種情況保證加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩地從LOAD狀態(tài)轉換到INJECT 狀態(tài)，以保證進(jìn)樣量的準確。日常工作中，液相色譜儀的保養非常重要，如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統和高壓泵中，儲液器內的溶液如長(cháng)時(shí)間未用應清洗儲液器并更換溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無(wú)機鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì)，完quan溶解，盡量減少對色譜柱的污染，以延長(cháng)色譜柱的使用壽命，同時(shí)避免注射過(guò)濃的樣品溶液，以免殘留液在進(jìn)樣閥內析出固體引起堵塞；色譜柱作好標記，用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。